Хроматографические методы Часть 4

график), но неподвижной фазой в ней служит фильтровальна бумага, импрегнированная растворителем. Поверхность волокоЯ чистой целлюлозы покрыта гидроксильными и карбоксильный группами, которые придают ей гидрофильный характер. Однако она может адсорбировать не только молекулы воды, но также молекулы других полярных растворителей. В волокнистой ?фильтровальной бумаге существуют два вида полярных фаз-одна представляет собой воду на поверхности целлюлозы, удер^ живаемую водородными связями, а другая оказывается несвя¬занной водой, находящейся между волокнами и, таким образом являющейся более подвижной, чем адсорбированная вода. Раз* деление веществ основано на различном распределении между этими двумя фазами, однако в этот процесс вовлекаются также адсорбция, ионный обмен и комплекеообразование.
На практике на бумагу наносят несколько микролитров от-носительно концентрированного раствора образца на расстоя¬нии 1—2 см от края и растворитель испаряют. На одну полоску бумаги можно нанести пятна нескольких образцов и стандарт¬ных веществ на расстоянии 1—2 см друг от друга. Следующий этап состоит в хроматографировании. Бумагу помещают в за¬крытый сосуд с растворителем (слой толщиной 1 см), стараясь, чтобы конец бумаги был опущен в растворитель, но пятна ве¬ществ были выше уровня жидкости. Сосуд закрывают для соз¬дания в нем атмосферы, насыщенной парами растворителя. Под влиянием капиллярных сил растворитель поднимается вверх по ?бумаге и переносит компоненты образца со скоростями, опре¬деляемыми коэффициентами распределения, в результате чего происходит их разделение. Когда фронт растворителя достиг¬нет необходимой высоты (около 2/3 или 3/4 длины полоски бу¬маги), хроматографирование считается законченным, бумагу вынимают из сосуда и высушивают. Пятна компонентов прояв¬ляют, обрабатывая бумагу раствором реагента. При этом по¬лучаются окрашенные или флуоресцирующие продукты. Так, например, для определения аминокислот используют нингидрин-

Страницы: 1 2 3 4 5